Tinción de GRAM:
Materiales:
Mechero, Asa, Desinfectante, Microscopio. Laminilla y cubre-objeto, Bandeja para hacer tinción, Tinte cristal violet, Iodo. Grams iodine, Alcohol o descolonizaste, Safranina, Agua
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana, se basan justamente en la tinción de GRAM. La secuencia de la tinción es la siguiente: el Frotis fijado con calor se tiñe 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con solución Yodada durante 1 min y se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla alcohol etílico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 20 seg. Lavar y secar.
Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram; Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas. Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.
Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen, primero con una solución de cristal violeta y son lavadas después para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las células, tanto las grampositivas como las gramnegativas, están teñidas de azul.
El portaobjetos se cubre entonces con una solución de yodo-yoduro potásico.El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta.
Se lleva a cabo después la decoloración, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen.
La diferencia esencial entre esos dos tipos de células está por tanto en su resistencia a la decoloración; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipídico y disuelve la membrana exterior de la pared de la célula. Las células grampositivas, a causa de sus paredes celulares más espesas. no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Después de la decoloración las células grampositivas son todavía azules, pero las gramnegativas son incoloras.
Para poner de manifiesto las células gramnegativas se utiliza un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules.
Tinción de Ziehl-Neelsen
Materiales: Mechero, Asa, Desinfectante, Microscopio. Laminilla y cubre-objeto, Bandeja para hacer tinción, colorante fucsina, Azul de metileno, agua, alcohol
La tinción de Ziehl-Nelsen es una técnica de tinción diferencial rápida, para identificar microorganismos patógenos.
Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl, un bacteriólogo y Friedrich Neelsen, un patólogo.
También es una tinción diferencial. Se denomina tinción ácido-alcohol resistente y es específica para una serie de bacterias con estructura de pared particular, las micobacterias. La pared de las micobacterias no está basada en peptidoglicano como las bacterias gram positivas y gram negativas, sino en ácidos micólicos. Esta particularidad las hace resistentes a la decoloración con ácido y alcohol que no se produce en casi ningún otro tipo bacteriano.
la coloración clásica de la Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.
Esta técnica puede utilizarse tanto en muestras histologicas como citologicas
La tinción de Ziehl-Neelsen utiliza tres reactivos. El colorante primario es la fucsina que tiñe toda la preparación de rojo brillante. Como mordiente se utiliza flameado de la preparación con el colorante. La solución decolorante elimina el colorante primario excepto el los bacilos ácido alcohol resistentes. (BAAR). Por último el azul de metileno tiñe de azul el resto de la preparación.
Esta tinción es útil en la detección de bacterias del género Micobacterium en muestras de esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul constituye un diagnóstico casi definitivo de tuberculosis.
Tinción hematoxilina-eosina
Materiales: Mechero, Asa, Desinfectante, Microscopio. Laminilla y cubre-objeto, Bandeja para hacer tinción, formalina, parafina, alcohol, Xileno, eosina
La tinción hematoxilina y eosina es uno de los métodos mas populares de tinción utilizado en histología y medicina diagnostica. El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas en tonos Azul y Púrpura,como por ejemplo los núcleos celulares;y el uso de eosina que tiñe componentes básicos en tonos de color rosa,
gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma
La tecnica de coloracion consiste en: la Fijación de la muestra con Formalina: Detiene el metabolismo y
conserva la estructura del tejido. (proteínas pero no lípidos)
Lavado y deshidratación: Extracción de alcohol con Xileno, luego inclusión de la muestra con
parafina fundida Coloracion con Eosina: deshidratación del corte con soluciones alcohólicas de
concentración creciente, y tincin con sololucion alcohólica de eosina. lavado con xileno.
La eosina es un colorante acido , por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del
citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmicos,
membranas intracelulares y fibras extracelulares
La hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante básico,
por lo cual se asocia y colorea estructuras aniónicas
Hola Lily, he revisado tu tarea y te notifico que tiene los requisitos solicitados, la califico como satisfactoria, muchas felicidades.
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